使用硫化氫電極監(jiān)測(cè)子宮肌瘤患者血漿中H?S濃度的變化，是一種研究H?S與疾病關(guān)聯(lián)的有效方法。以下是關(guān)鍵步驟和注意事項(xiàng)：

1.樣本前處理

抗凝處理：采集血漿時(shí)使用肝素或EDTA抗凝，避免溶血（紅細(xì)胞內(nèi)含H?S會(huì)影響結(jié)果）。

快速處理：H?S易揮發(fā)且易被氧化，樣本需在采集后30分鐘內(nèi)離心（4°C，3000 rpm，10分鐘），分離血漿后立即測(cè)定或-80°C保存（短期可-20°C）。

緩沖液添加：測(cè)定前用堿性緩沖液（如pH 9.0的Tris-HCl）穩(wěn)定H?S，減少揮發(fā)。

2.電極校準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用Na?S或NaHS配制H?S標(biāo)準(zhǔn)液（如0.1μM~100μM），現(xiàn)配現(xiàn)用（溶于脫氧去離子水或緩沖液）。

校準(zhǔn)曲線：在相同溫度下（如25°C）繪制電極響應(yīng)曲線（mV vs.log[H?S]），確保線性（R2>0.99）。

3.測(cè)定步驟

溫度控制：全程在恒溫（如25°C）下操作，避免溫度波動(dòng)影響電極靈敏度。

反應(yīng)體系：將血漿樣本與等體積緩沖液混合，插入電極，待讀數(shù)穩(wěn)定（通常2~5分鐘）。

干擾排除：

抗氧化劑：加入抗壞血酸（1 mM）抑制H?S氧化。

金屬離子：用EDTA（0.1 mM）螯合金屬離子（如Cu2?、Fe3?）。

4.數(shù)據(jù)分析

濃度計(jì)算：根據(jù)校準(zhǔn)曲線將電極響應(yīng)值轉(zhuǎn)換為[H?S]。

對(duì)照組設(shè)置：需匹配健康人群或非肌瘤患者的血漿樣本，排除個(gè)體差異。

統(tǒng)計(jì)方法：采用t檢驗(yàn)或ANOVA比較組間差異，考慮年齡、月經(jīng)周期等混雜因素。

5.注意事項(xiàng)

電極維護(hù)：使用后用去離子水清洗，長(zhǎng)期不用時(shí)干燥保存。

質(zhì)量控制：每批樣本加入高/低濃度質(zhì)控品，確保電極穩(wěn)定性。

交叉驗(yàn)證：可輔以亞甲基藍(lán)法或熒光探針?lè)?yàn)證結(jié)果。

6.預(yù)期結(jié)果與意義

子宮肌瘤患者：可能顯示血漿H?S濃度降低（與正常組相比），因H?S的抗增殖和血管舒張作用可能與肌瘤生長(zhǎng)抑制相關(guān)。

研究?jī)r(jià)值：為探索H?S作為疾病標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)提供依據(jù)。